PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

孔状短小茎点霉CA1 (Carbonic Anhydrase I) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌CA2 (Carbonic Anhydrase 2) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

申氏不动杆菌*PICP (Procollagen I C-terminal Propeptide) ELISA Kit拉丁属名: Acinetobacter schindleri

单色下皮黑孔菌CEA (Carcinoembryonic Antign) ELISA Kit 拉丁属名: Cerrena unicolor

海榄雌小单孢菌PINP (Procollagen Type I N-Terminal Propeptide) ELISA Kit拉丁属名: Micromonospora avicenniae

致密曲霉CLS (Cardiolipin Synthase) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus delicatus

植物乳杆菌CLCF1 (Cardiotrophin Like Cytokine Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Lactobacillus  plantarum

云南红球菌CT-1 (Cardiotrophln 1) ELISA Kit拉丁属名: Rhodococcus yunnanensis

动球菌COMP (Cartilage Oligomeric Matrix Protein) ELISA Kit 拉丁属名: Kineococcus sp.

新城疫病毒CASP3 (Caspase 3) ELISA Kit拉丁属名: Newcastle       disease virus

嗜盐碱球菌CASP4 (Caspase 4) ELISA Kit 拉丁属名: Natronococcus  sp.

紫萁小菇CASP7 (Caspase 7) ELISA Kit 拉丁属名: Mycena purpureofusca

弯孢菌CASP9 (Caspase 9) ELISA Kit用途: 研究

Curvularia  cocis Matsush. CASP10 (Caspase 10) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

谢瓦曲霉CASP11 (Caspase 11) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus chevalieri
猪布鲁氏杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书TIEG1/KLF10(TGF-beta inducible early response gene 1)  TGF-β诱导早期应答基因1抗原沙苑子苷AComplanatoside A中药标准品  分 子 式: C28H32O16 分 子 量: 624.54408

TGF- BetaR1/ALK (TGF-beta receptor type I)  转移生长因子–β受体1抗原盐酸强力霉素Doxycycline hyclate化学标准品 分 子 式: C22H24N2O8.HCl 分 子 量: 480.90

Erdj5/DNAJC10  Erdj5/DNAJC10多肽磷酸缓冲盐粉剂(1×PBS,无钙镁)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Tie1/JTK14 peptide  上皮生长因子样域酪氨酸激酶1抗原巴卡亭IIIBaccatine III中药标准品  分 子 式: C31H38O11 分 子 量: 586.62682

Tie2(Porcine tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2)  上皮生长因子样域酪氨酸激酶2抗原蜡果杨梅酸 BOlean-12-en-28-oic acid,27-[[(2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1- oxo-2-propenyl]oxy]-3-hydroxy-,(3a)- 对照药材 分 子 式: C39H54O7 分 子 量: 634.84186

Rarres2/TIG2/Chemerin(Retinoic acid receptor responder protein 2)  视黄酸受体应答蛋白2抗原波棱酮Herpetone化学标准品 分 子 式: C29H30O9 分 子 量: 522.5431

TLR3 (Toll-like receptor 3)  Toll样受体3抗原西红花苷Crocin中药标准品  分 子 式: C44H64O24 分 子 量: 976.96