PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

白地霉GROβ (Growth Regulated Oncogene Beta) ELISA Kit拉丁属名: Geotrichum  candidum

米洛斯线芽孢杆菌CXCL9/MIG(Monokine induced by interferon-gamma)ELISA Kit拉丁属名: Filobacillus milosensis

停乳链球菌IP-10/CXCL10 (Interferon Gamma Induced Protein 10kDa) ELISA Kit拉丁属名: Streptococcus dysgalactiae

Mesorhizobium silamurunenseCyt C (Cytochrome C) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

荣州农研所丝杆菌DKK1 (Dickkopf Related Protein 1)ELISA Kit拉丁属名: Niasla  yeongjuensis

志贺氏菌51105EGF (Epidermal growth factor) ELISA Kit规格: 冻干粉

大肠杆菌ESM1 (Endothelial Cell Specific Molecule 1) ELISA Kit用途: 教学科研，研究苯酚羟化酶的调控方式。

空肠弯曲杆菌EPO (Erythropoietin) ELISA Kit 拉丁属名: jejuni

干草鞘氨单胞菌FASL (Factor Related Apoptosis Ligand) ELISA Kit 拉丁属名: Sphingomonas faeni

短裙竹荪FGF21(Fibroblast Growth Factor 21) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜热脂肪地芽孢杆菌Flt3L (FMS Like Tyrosine Kinase 3 Ligand) ELISA Kit 拉丁属名: Geobacillus  stearothermophilus

Roseivivax lentusG-CSF (Granulocyte Colony Stimulating Factor) ELISA Kit 拉丁属名: Roseivivax lentus

栗疫菌GM-CSF (Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor) ELISA Kit拉丁属名: Cryphonectria parasitica

假芝IFN-β (Interferon Beta) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

华盛顿腥掷孢菌IGF-1 (Insulin-like growth factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Tilletiopsis washingtonensis
牛细小病毒探针法荧光定量PCR试剂盒说明书Adipo R2(adiponectin receptor 2)  脂联素受体-2(抗原)盐酸金霉素溶液(Chlortetracycline,5mg/ml)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PSAP/PAP peptide  酸性磷酸酶抗原2,6-二甲基萘2,6-Dimethylnaphthalene化学标准品 分 子 式: C12H12 分 子 量: 156.22368

PSAP/PAP peptide (human)  酸性磷酸酶抗原(人)β-香树脂醇乙酸酯Olean-12-en-3-ol,3-acetate, (3b)-对照药材 分 子 式: C32H52O2 分 子 量: 468.75408

P-selectin  P选择素抗原硫酸镁溶液(1mol/L,无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CD63/MLA1  溶酶体膜糖蛋白抗原苦瓜苷AMomordicoside A化学标准品 分 子 式: C42H72O15 分 子 量: 817.01208

PTEN/MMAC1(CT)human, mo, rat, pig, dog, bovine, horse, chicken  一种抑制基因抗原（C端）3-表齐墩果酸3-Epioleanolic acid中药标准品  分 子 式: C30H48O3 分 子 量: 456.70032

Parvalbumin  微白蛋白/细小清蛋白抗原鸡屎藤苷酸Cyclopenta[c]pyran-4-carboxylicacid, 1-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,4a,5,7a-tetrahydro-5-hydroxy-7-[[[(methylthio)carbonyl]oxy]methyl]-,(1S,4aS,5S,7aS)-中药标准品  分 子 式: C18H24O12S 分 子 量: