客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
以下列是公司正在热销的产品：

宋氏志贺氏菌sFLT-1(Receptor for Vascular Endothelial cell Growth Factor VEGF) ELISA KIT拉丁属名: Shigella  sonnei

耻垢分枝杆菌PSMA(Prostate specific membrane antigen) ELISA KIT拉丁属名: Mycobacterium smegmatis

深绿木霉SORT1(Sortilin 1) ELISA Kit拉丁属名: Trichoderma atroviride

大肠埃希菌NID2 (Nidogen 2) ELISA Kit拉丁属名: coli

米曲霉ICA(islet cell antibody)ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  oryzae

产气荚膜梭菌 毒素D型Peth(Phosphatidylethanol)ELISA Kit拉丁属名: perfringens Type D

薄边蜂窝孔菌MAC (Membrane Attack Complex) ELISA Kit拉丁属名: Hexagonia tenuis

黑曲霉25(OH)D(25-Hydroxy Vitamin D) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

铜绿假单胞菌HPF4(Heparin/Platelet Factor 4 Antibodies)ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  aeruginosa

果生链核盘菌GRIA1(Glutamate receptor 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

四川散斑壳IMA(Ischemia Modified Albumin)ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

针层孔菌属注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

拟可可毛球二孢ACV-A (Activin A) ELISA Kit拉丁属名: Lasiodiplodia pseudotheobromae

乳酸乳球菌乳脂亚种ADP/Acrp30 (Adiponectin) ELISA Kit拉丁属名: Lactococcus lactis subsp. cremoris

酿酒酵母ANG3 (Angiopoietin 3) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae
牛病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 PKA(Protein Kinase A)  蛋白激酶A(多肽)石斛酚Phenol,4-[2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)ethyl]-2,6-dimethoxy-中药标准品  分 子 式: C17H20O5 分 子 量: 304.3377

PLAU/uPA (Plasminogen activator,urokinase)  尿激酶型纤溶酶原激活因子（多肽）双缩脲试剂(AB液)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Podoplanin Protein  平足蛋白抗原莽草酸3,4,5-Trihydroxycyclohex-1-enecarboxylic acid中药标准品  分 子 式: C7H10O5 分 子 量: 174.1513

Pokemon (POK Erythroid Myeloid Ontogenic factor)  “扑克蒙”蛋白又称“波克曼”蛋白垂盆钞草甙(治肝炎药)，垂盆草甙2-Butenenitrile, 4-(b-D-glucopyranosyloxy)-2-(hydroxymethyl)-,(2E)-对照药材 分 子 式: C11H17NO7 分 子 量: 275.25518

Polycystin 1(Polycystic Kidney Disease 1)  蛋白1抗原脱氧胆酸钠溶液(10%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Polycystin 2(polycystic kidney disease 2)  蛋白2抗体甘油三油酸酯triolein中药标准品  分 子 式: C57H104O6 分 子 量: 885.44

phospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473)peptide  磷酸化蛋白激酶B抗原（丝氨酸磷酸化位点：473）台湾三尖杉碱wilsonine对照药材 分 子 式: C20H25NO4 分 子 量: 343.4168