PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

杨烂皮壳蕉孢菌 PI3/Elafin (Peptidase Inhibitor 3, Skin Derived) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

腐蚀柠檬酸杆菌TTPα (Alpha Tocopherol Transfer Protein) ELISA Kit拉丁属名: Citrobacter rodentium

pRE112 FNDC5 (Fibronectin Type III Domain Containing Protein 5) ELISA Kit拉丁属名: 宿主：DH5α，BL21

黑马朗假丝酵母IL-21 (Interleukin 21) ELISA Kit拉丁属名: Candida haemulonii

爱媛链轮丝菌SSADH (Succinate-semialdehyde dehydrogenase, mitochondrial) ELISA Kit用途: 代谢产物具有弱的抗菌活性。

枯草芽孢杆菌POSTN/OSF-2 (Periostin) ELISA Kit  拉丁属名: Bacillus subtilis

鸡伤寒沙门氏菌MMP-15 (Matrix Metalloproteinase 15) ELISA Kit 拉丁属名: gallinarum

亚球毛壳MMP-14 (Matrix Metalloproteinase 14) ELISA Kit 拉丁属名: Chaetomium subglobosum

干草寒冷杆菌VLDL (Very Low Density Lipoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Frigoribacterium faeni  faeni

谷氨酸棒杆菌LCAT (Lecithin-Cholesterol Acyltransferase) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

纤维微菌属CYP2E1 (Cytochrome P450, family 2, subfamily E, polypeptide 1) ELISA Kit拉丁属名: Cellulosimicrobium sp.

鸭疫里氏杆菌UCRP (Ubiquitin Cross Reactive Protein) ELISA Kit拉丁属名: anatipestifer

解淀粉芽孢杆菌解淀粉亚种IFN-α (Interferon Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  amyloliquefaciens subsp. amyloliquefaciens

Rhizobium miluonenseDAG1 (Dystrophin Associated Glycoprotein 1) ELISA Kit用途: 固氮

优洛菌素链霉菌HABP1/C1QBP (Hyaluronan Binding Protein 1) ELISA Kit  拉丁属名: Streptomyces eurocidicus
牛病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒 PAFR/PTAFR  血小板活化因子受体抗原异嗪皮啶7-O-beta-D-葡萄糖苷2H-1-Benzopyran-2-one,7-(a-Dglucopyranosyloxy)- 6,8-dimethoxy- 化学标准品 分 子 式: C14H14O4 分 子 量: 246.25856

Phospho-PAK4 (Ser99) peptide  磷酸化p21激活激酶4多肽抗原DNase/RNase混合液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PAK7/PAK5/MBT  激活激酶PAK7/PAK5抗原乙酰托品醇8-Azabicyclo[3.2.1]octan-3-ol,8-methyl-, 3-acetate, (3-endo)-化学标准品 分 子 式: C10H17NO2 分 子 量: 183.24748

PAR-1 (Protease-activated receptors-1)  蛋白酶激活受体-1抗原2,6-二氟苯甲酸2,6-Difluorobenzoic acid化学标准品 分 子 式: C7H4O2F2 分 子 量: 158.10226

PAR-2 (Protease-activated receptors-2)  蛋白酶激活受体-2抗原乳酸银显影液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PAR4 (protease-activated receptor 4)  蛋白酶活化受体4/细胞凋亡反应蛋白4抗原毛蕊异黄酮苷CALYCOSIN 7-O-GLUCOSIDE中药标准品  分 子 式: C22H22O10 分 子 量: 446.40408

PARP(poly ADP-ribose polymerase)N-Terminus  多腺苷二磷酸多聚酶抗原(N端)去甲异波尔定 中药标准品  分 子 式: C18H19NO4 分 子 量: 313.34776