PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

纤维纤维微菌UBAP2 (Ubiquitin Associated Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Cellulosimicrobium cellulans

冷温木拉克酵母MASP1 (Mannan Associated Serine Protease 1) ELISA Kit拉丁属名: Mrakia frigida

斯氏土地杆菌MASP2 (Mannan Associated Serine Protease 2) ELISA Kit拉丁属名: Pedobacter steynii

大肠埃希氏菌USP8 (Ubiquitin Specific Peptidase 8) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

弗雷德里克斯堡假单胞菌DPP6 (Dipeptidyl Peptidase VI) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas frederiksbergensis

克鲁斯假丝酵母MRC2 (Mannose Receptor C Type 2) ELISA Kit拉丁属名: Candida  krusei

小壳焦孢属MRC1 (Mannose Receptor C Type 1 ) ELISA Kit用途: 植物病原物；用于该类群菌的系统学研究

酿酒酵母MRC1 (Mannose Receptor C Type 1 Like Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae

酿酒酵母GADL1 (Glutamate Decarboxylase Like Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

蜡状芽孢杆菌GAD1 (Glutamate Decarboxylase 1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  cereus

苏云金芽孢杆菌PEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus thuringiensis Berliner

白僵菌PPAR-δ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Delta) ELISA Kit用途: 害虫生物防治

喉病毒NUP62 (Nucleoporin 62kDa) ELISA Kit拉丁属名: Infectious       laryngotracheitis virus

酿酒酵母PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

矩圆黑盘孢RANκ (Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
牛巨细胞病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 NR1/NMDAR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨酸受体1（多肽）香草乙酮Acetovanillone中药标准品  分 子 式: C9H10O3 分 子 量: 166.1739

NR1/NMDAR1/GLUR1(N-Methyl-d-Asprtate receptor 1)  谷氨酸受体1抗原人参皂苷Rb2ginsenoside rb2中药标准品  分 子 式: C53H90O22 分 子 量: 1079.27

NR1/NMDAR1  谷氨酸受体13-O-(2'E,4'Z-癸二烯酰基)巨大戟二萜醇2,4-Decadienoic acid,(1aR,2R,5R,*S,6S,8aS,9R,10aR)-1a,2,5,*,6,9,10,10a-octahydro-5,*-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)-1,1,7,9-tetramethyl-11-oxo-1H-2,8a-methanocyclopenta[a]cyclopropa[e]cyclodecen-6-ylester, (2E,4Z)-化学标准品 分 子 式: C30H42O6 分 子 量:

NR2C/NMDAR2C(N-Methyl-d-Asprtate receptor 2C)  谷氨酸受体2C（多肽）去甲氧基去乙酰氧基土槿甲酸 BDemethoxydeacetoxypseudolaric-acid-B对照药材 分 子 式: C20H24O7 分 子 量: 376.40036

N-ras  原癌基因抗原5-(Z-十七-8-烯基)邻苯二酚5-(Heptadec-8-en-1-yl)benzene-1,3-diol对照药材 分 子 式: C23H38O2 分 子 量: 346.54662

Nrf2 peptide  核因子2相关因子2抗原抗体储存液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

NRF-1(nuclear respiratory factor-1)  核呼吸因子-1抗原新西兰牡荆苷Vicenin-2中药标准品  分 子 式: C27H30O15 分 子 量: 594.52