PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

Paraconiothyrium sp.PC4 (Positive Cofactor 4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

火木层孔菌LpPLA2 (Phospholipase A2, Lipoprotein Associated) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

异常汉逊酵母LPL (Lipoprotein Lipase) ELISA Kit拉丁属名: Hansenula  anomala

锗栓孔菌 (淡黄褐栓菌)LBP (Lipopolysaccharide Binding Protein) ELISA Kit拉丁属名: Trametes ochracea

德氏乳杆菌保加利亚亚种IL4I1 (Interleukin 4 Induced Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus  delbrueckii subsp. bulgaricus

脱硫弧菌脱硫亚种（脱硫微螺菌、脱硫螺菌、脱硫杆菌、脱硫芽孢弧菌、脱硫弧菌）GYS1 (Glycogen Synthase 1, Muscle) ELISA Kit拉丁属名: Desulfovibrio desulfuricans subsp. desulfuricans

松针散斑壳GYS2 (Glycogen Synthase 2, Liver) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

菌生假丝酵母OSMR (Oncostatin M Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Candida laureliae

肿痂链霉菌MK (Midkine) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces turgidiscabies

光柄滑锈伞PON1 (Paraoxonase 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

辽宁类芽孢杆菌HNP1-3 (Neutrophil Peptide 1-3) ELISA Kit拉丁属名: Paenibacillus liaoningensis

蚁巢伞属NAP3 (Neutrophil Activating Protein 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希菌NAP (Neutrophil Alkaline Phosphatase) ELISA Kit拉丁属名: coli

运动节杆菌PFN1 (Profilin 1) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter agilis

酿酒酵母ADAM22 (A Disintegrin And Metalloprotease 22) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae
达氏疏螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒说明书MPO peptide  髓过氧化物酶抗原单密利特苷化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

MRP2 (multidrug resistance-associated protein2)  多药耐药相关蛋白2茶黄素-3,3'-双没食子酸Theaflavine-3,3'-digallate中药标准品  分 子 式: C43H32O20 分 子 量: 868.702180000001

MRP5/ABCC5(Multidrug Resistanec-Associated Protein 5)  多药耐药相关蛋白5抗原人参皂苷Rg2Ginsenoside Rg2中药标准品  分 子 式: C42H72O13 分 子 量: 785.01328

MrpL28 (mitochondrial ribosomal protein L28)  线粒体核糖体蛋白L28(抗原)高紫檀素Homopterocarpin化学标准品 分 子 式: C17H16O4 分 子 量: 284.30654

MLH1(Mutl homolog l gene)  错配修复蛋白1抗原丹叶大黄素-3'-O-葡萄糖苷rhapontigenin 3'-O-beta-D-glucopyranoside化学标准品 分 子 式: C21H24O9 分 子 量: 420.41

MUC5AC/Mucin 5AC(Gastric Mucin M1)  胃粘液素抗原苦瓜皂苷 GMomordicoside G对照药材 分 子 式: C38H60O8 分 子 量: 644.8782

MTNR1B/MTNR-1B(Melatonin receptor 1B)  褪黑素受体1B抗原二十五烷pentacosane化学标准品 分 子 式: C25H52 分 子 量: 352.68038