PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

空肠弯曲杆菌tPA (Plasminogen Activator, Tissue) ELISA Kit拉丁属名: jejuni

生活饮用水  钙、镁 TAFI (Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor) ELISA Kit 拉丁属名: 生活饮用水  钙、镁

食物盐单胞菌FBL (Fibrillarin) ELISA Kit 拉丁属名: Halomonas alimentaria

相思根瘤菌GHR (Growth Hormone Receptor) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母FGα (Fibrinogen Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  Cerevisiae

产黄青霉FGβ (Fibrinogen Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium chrysogenum

细极链格孢（可订购）FGL2 (Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

产二素链霉菌FRA (Fibronection Related Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces ambofaciens

托木尔假单胞菌FSP (Fibroblast Surface Protein) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas tuomuerensis

枯草芽胞杆菌SOD2 (Superoxide Dismutase 2, Mitochondrial) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis

泛菌属CKMT1A (Creatine Kinase, Mitochondrial 1A ) ELISA Kit 拉丁属名: Pantoea  sp.

鹫峰假丝酵母CKMT1B (Creatine Kinase, Mitochondrial 1B ) ELISA Kit 拉丁属名: Candida jiufengensis

派伦霉属KRT10 (Keratin, Type I Cytoskeletal 10) ELISA Kit拉丁属名: Peyronellaea  sp.

天蓝色链霉菌SNRPD1 (Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide D1) ELISA Kit 用途: 代谢产物具有活性。

产朊假丝酵母SNRPC (Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide C) ELISA Kit 拉丁属名: Candida utilis
杀蛎包拉米虫探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Inhibin Alpha  抑制素α抗原去氧穿心莲内酯Deoxyandrographolide中药标准品  分 子 式: C20H30O4 分 子 量: 334.4498

Inhibin beta A peptide  抑制素beta A抗原矮陀陀胺碱 APregn-5-en-20-amine,3-methoxy-N,N-dimethyl-, (3b,20S)- (9CI)对照药材 分 子 式: C24H41NO 分 子 量:

Inhibin beta B  抑制素βB抗原雷帕霉素rapamycin from streptomyces*hygroscopicus中药标准品  分 子 式: C51H79NO13 分 子 量: 914.18

Integrin Alpha3  整合素α3抗原丹参酮ITanshinone I中药标准品  分 子 式: C18H12O3 分 子 量: 276.29

Integrin Beta5  整合素β5抗原橙花醇(Z)-3,7-Dimethylocta-2,6-dien-1-ol中药标准品  分 子 式: C10H18O 分 子 量: 154.24932

Integrin alpha 1  整合素α1抗原内源性生物素封闭液标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7)  整合素α4β7抗原牛蒡子苷元-4'-O-β-龙胆二糖苷Arctigenin-4'-beta-gentiobiosid化学标准品 分 子 式: C33H44O16 分 子 量: 696.693