PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希氏菌NCAM/CD56 (Neural Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia coli

猴头菌—50043L1CAM/CD171 (L1-Cell Adhesion Molecule) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

米罗布里格小单孢菌NT-3 (Neurotrophin-3) ELISA Kit 拉丁属名: Micromonospora mirobrigensis

米曲霉NT-4 (Neurotrophin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus Oryzae

苏云金芽孢杆菌NTRK2 (Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 2 ) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus thuringiensis Berliner

大肠埃希菌NTRK3 (Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 3 ) ELISA Kit 拉丁属名: coli

西西布哈加瓦氏菌NAIP (Neuronal Apoptosis Inhibitory Protein) ELISA Kit拉丁属名: Bhargavaea cecembensis

谷氨酸棒状杆菌ATCC13032NPHN (Nephrin) ELISA Kit规格: 冰袋泡沫盒快递

米根霉GTEAGE (Glomerular Tissue Extract Advanced Glycosylation End Products) ELISA Kit用途: 饲料用酶的筛选

慢生根瘤菌GROβ (Growth Regulated Oncogene Beta) ELISA Kit用途: 与花生共生固氮良好

变异短波单胞菌GROγ (Growth Regulated Oncogene Gamma) ELISA Kit拉丁属名: Brevundimonas variabilis

多粘芽孢杆菌GDF1 (Growth Differentiation Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus polymyxa

美澳型核果褐腐病菌GDF10 (Growth Differentiation Factor 10) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉GDF11 (Growth Differentiation Factor 11) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  niger

平菇GDF2 (Growth Differentiation Factor 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
箭毒蛙壶菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商HA tag  HA tag标签多肽红细胞洗涤液(pH7.2)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

HA tag(map)  HA tag标签（分支多肽）穿心莲内酯苷2(3H)-Furanone,3-[2-[(1R,4aS,5R,6R,8aS)-5-[(b-D-glucopyranosyloxy)methyl]decahydro-6-hydroxy-5,8a-dimethyl-2-methylene-1-naphthalenyl]ethylidene]dihydro-4-hydroxy-,(3E,4S)-对照药材 分 子 式: C26H40O10 分 子 量: 512.5898

HAI-1(Hepatocyte Growth Factor Activator Inhibitor 1)  肝细胞生长因子激活物抑制因子抗原氯化飞燕草素-3-O-葡萄糖苷1-Benzopyrylium, 3-(b-D-glucopyranosyloxy)-5,7-dihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)-,chloride (1:1)化学标准品 分 子 式: C21H21O12+.Cl- 分 子 量: 500.83724

HBA1(hemoglobin alpha 1)  人类血红蛋白α1抗原甲基当药宁1,8-Dihydroxy-2,6-dimethoxy-9H-xanthen-9-one中药标准品  分 子 式: C15H12O6 分 子 量: 288.25218

VWCE/URG11(von Willebrand factor C and EGF domain-containing)  病毒X蛋白(HBxAg)抗原盐酸药根碱Jatrorrhizine Hydrochloride。化学标准品 分 子 式: C20H20NO4 分 子 量: 373.84

URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)  病毒X蛋白(HBxAg)抗原花旗松素Taxifolin中药标准品  分 子 式: C15H12O7 分 子 量: 304.25

URGCP/URG4(Up-regulator of cell proliferation)C terminal  肝炎病毒X蛋白(HBxAg)C端抗原山柰酚-3-O-芸香糖苷4H-1-Benzopyran-4-one,3-[[6-O-(6-deoxy-a-L-mannopyranosyl)-b-D-glucopyranosyl]oxy]-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-中药标准品  分 子 式: C27H30O15 分 子 量: