PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

苏云金芽孢杆菌DAP6 (Death Associated Protein 6) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

淡青链霉菌TACR1 (Tachykinin Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces glaucescens

香菇TACR2 (Tachykinin Receptor 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄色短杆菌TACR3 (Tachykinin Receptor 3) ELISA Kit拉丁属名: Brevibacterium  flavum

三叶草根瘤菌Anti-MPO (Anti-Myeloperoxidase Antibody) ELISA Kit用途: 与三叶草共生固氮

大肠埃希氏菌PLP1 (Proteolipid Protein 1, Myelin) ELISA Kit 拉丁属名: Escherichia  coli

果生链核盘菌MyD88 (Myeloid Differentiation Factor 88) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

ParacoccusPOT1 (Protection of Telomeres Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: Paracoccus

异常汉逊酵母HBF (Fetal Hemoglobin) ELISA Kit拉丁属名: Hansenula anomala (Hansen) H. et P. Sydow

露湿漆斑菌PR3 (Proteinase 3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

玫瑰色红球菌PL (Placental Lactogen) ELISA Kit拉丁属名: Rhodococcus rhodochrous

巨兽芽孢杆菌PP (Placental Protein) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus megaterium

链球菌PP13 (Placental Protein13) ELISA Kit拉丁属名: Streptococcus pneumonia

地衣芽孢杆菌PP14 (Placental Protein14) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus licheniformis

清酒假丝酵母PRI (Placental Ribonuclease Inhibitor) ELISA Kit拉丁属名: Candida sake
海藻百伯史坦菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商HLA-E  人类白细胞抗原E戊唑醇Tebuconazole化学标准品 分 子 式: C16H22ClN3O 分 子 量: 307.82

Anti-HMGA1 (high mobility group AT-hook 1)  高迁移率族蛋白A1抗原麦冬苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基（1→2）-β-D-吡喃葡萄糖苷Ophiogenin-3-O-α-L-rhaMnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

HMGA2 (high mobility group A2)  高迁移率族蛋白A2抗原洛莫司汀1-(2-Chloroethyl)-3-cyclohexyl-1-nitrosourea其它化学试剂 分 子 式: C9H16N3O2Cl 分 子 量: 233.69524

HO-1/HSP32 (Hemeo xygenase 1)  血红素氧合酶-1/热休克蛋白-32抗原P:C:I(125:24:1,pH﹤5.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

HO-1/HSP32(Hemeo xygenase 1)  血红素氧合酶-1/热休克蛋白-32抗原鬼臼毒素-4-O-葡萄糖苷Furo[3',4':6,7]naphtho[2,3-d]-1,3-dioxol-6(*H)-one,9-(b-D-glucopyranosyloxy)-5,8,8a,9-tetrahydro-5-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-,(5R,*R,8aR,9R)-中药标准品  分 子 式: C28H32O13 分 子 量: 576.54588

HO-2(Heme oxygenase 2)  血红素氧合酶-2抗原苯甲醛Benzaldehyde中药标准品  分 子 式: C7H6O 分 子 量: 106.12194

phospho-HP1/heterochromatin protein 1 (pTyr24)(fruit fly)  异染色质蛋白1(磷酸化多肽)毛两面针素Toddaline中药标准品  分 子 式: C16H20O6 分 子 量: 308.3264