PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

多主葡萄壳菌CDSN (Corneodesmosin) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

短密青霉CNTN1 (Contactin 1) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium brevi-compactum

黑曲霉CNTN2 (Contactin 2) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus niger

香菇CNTN3 (Contactin 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉CNTN4 (Contactin 4) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  niger

酿酒酵母CNTNAP1 (Contactin Associated Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

梨轮纹病菌CNTNAP4 (Contactin Associated Protein 4) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌ELMO2 (Engulfment And Cell Motility 2) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis

草分枝杆菌Des (Desmin) ELISA Kit拉丁属名: Mycobacterium phlei

线壳囊孢(座线孢)SSRP1 (Structure Specific Recognition Protein 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

百脉根中间根瘤菌HP (Haptoglobin) ELISA Kit拉丁属名: Mesorhizobium loti

烟色齿耳HPR (Haptoglobin Related Protein) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

栎金钱菌TNNT1 (Troponin T Type 1, Slow Skeletal) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

反硝化盐单胞菌TNPO2 (Transportin 2) ELISA Kit 拉丁属名: Halomonas denitrificans

薄层菌属UCP-2 (Uncoupling Protein 2, Mitochondrial) ELISA Kit拉丁属名: Hymenobacter  roseosalivarius
莫氏巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒 CRLR/CALCRL(calcitonin receptor like precursor)  降钙素受体样蛋白抗原木栓酮Friedelin中药标准品  分 子 式: C30H50O 分 子 量: 426.7174

cRaf/Raf1(c-raf 1)  cRaf/Raf1抗原甘草酸二钾Glycyrrhizicaciddipotassiumsalt, hydrate脂肪酸类 分 子 式: C42H60O16-2.2[K+] 分 子 量: 899.112800000001

MEK1/MAPKK1(mitogen activated protein kinase kinase 1)  MEK1/MAPKK1抗体(N-端)雀舌黄杨碱BBuxbodine B对照药材 分 子 式:  分 子 量:

CRF (Corticotropin-Releasing Factor)  促肾上腺皮质激素释放因子氧化芍药苷Oxypaeoniflora中药标准品  分 子 式: C23H28O12 分 子 量: 496.46

CSIG(cellular senescence inhibited gene)  细胞衰老抑制基因抗原25-脱水泽泻醇A;泽泻醇GDammara-13(17),25-dien-3-one,11,23,24-trihydroxy-, (8a,9b,11b,14b,23S,24S)-中药标准品  分 子 式: C30H48O4 分 子 量:

Cripto-1(N-Terminus)  衍化生长因子抗原(表皮生长因子相关肽)N端ABTS试剂标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Cripto-1(C-Terminus)  衍化生长因子抗原(表皮生长因子相关肽)C端银杏酚酸中药标准品  分 子 式:  分 子 量: