PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

阪崎肠杆菌UBD (Ubiquitin D) ELISA Kit拉丁属名: Enterobacter  sakazakii

黑曲霉DUB (Deubiquitinating Enzyme) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

环状芽孢杆菌UBE1L (Ubiquitin Activating Enzyme E1 Like Protein) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus circulans

Rhizobium multihospitiumUBE2C (Ubiquitin Conjugating Enzyme E2C) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母UBE3A (Ubiquitin Protein Ligase E3A) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

附着孢小隔指孢NNE (Non-Neuronal Enolase) ELISA Kit拉丁属名: Dactylellina haptospora

绿菇SDC3 (Syndecan 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

双孢蘑菇TPS (Tryptase) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

假单胞菌FBLN5 (Fibulin 5) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嗜中温寒冷杆菌DR-70TM (Tumor Marker DR-70 For Lung Cancer) ELISA Kit拉丁属名: Frigoribacterium  mesophilum

焦曲霉REG1β (Regenerating Islet Derived Protein 1 Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus ustus

绿色木霉SPA (Pulmonary Surfactant Associated Protein A) ELISA Kit 用途: 资源真菌

枯草芽孢杆菌枯草亚种SPB (Pulmonary Surfactant Associated Protein B) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis subsp. subtilis

Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorumSPC (Pulmonary Surfactant Associated Protein C) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

枯草芽孢杆菌枯草亚种SPD (Pulmonary Surfactant Associated Protein D) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus subtilis subsp. subtilis
奥叶兹基氏病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒规格MIP-3 beta/ELC/CCL19(Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta)  巨噬细胞炎性蛋白19抗原密力特苷Melittoside化学标准品 分 子 式: C21H32O15 分 子 量: 524.47

CCL26(Eotaxin 3)  嗜酸粒细胞趋化蛋白3抗原硝酸银水溶液(10%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CCR-1(CC chemokine receptor 1)  细胞表面趋化因子受体1抗原泽泻醇A-24-醋酸酯;Alisol A 24-acetate中药标准品  分 子 式: C32H52O6 分 子 量: 532.75168

CCR-3(CC chemokine receptor 3)  CC趋化因子受体3抗原盐酸纳洛酮naloxone hydrochloride化学标准品 分 子 式: C19H22NO4+ 分 子 量: 328.38228

CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A)  细胞表面趋化因子受体2A抗原(+)-丁香树脂酚Phenol,4,4'-(tetrahydro-1H,3H-furo[3,4-c]furan-1,4-diyl)bis[2,6-dimethoxy-化学标准品 分 子 式: C22H26O8 分 子 量: 418.43704

CCR-4(C-C chemokine receptor 4)  细胞表面趋化因子受体4抗原桑呋喃A2-{2-[(2E)-3,7-dimethylocta-2,6-dien-1-yl]-5-hydroxy-3-methoxyphenyl}-1-benzofuran-6-ol化学标准品 分 子 式: C25H28O4 分 子 量: 392.48742

CCR-6/CD196 peptide  细胞表面趋化因子受体6抗原乙酸雷公藤内酯AOlean-12-en-29-oic acid, 3-(acetyloxy)-22-hydroxy-, g-lactone,

(3b,20a,22a)-化学标准品 分 子 式: C32H48O4 分 子 量: