PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

RisungbinellaFABP5 (Fatty Acid Binding Protein 5, Epidermal ) ELISA Kit拉丁属名: Risungbinella  pyongyangensis

枯草芽孢杆菌枯草亚种VEGFR1/FLT1 (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  subtilis subsp. subtilis

链格孢ET (Epitestosterone) ELISA Kit拉丁属名: Alternaria  Alternata

灰蓝毛霉PKM2 (Pyruvate Kinase, Muscle) ELISA Kit拉丁属名: Mucor griseo

草假单胞菌PDH E1 (Pyruvate Dehydrogenase E1) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas graminis

异常汉逊酵母异常变种PDHα (Pyruvate Dehydrogenase Alpha) ELISA Kit 拉丁属名: Hansenula  anomala var. anomala

黄柄曲霉PDK4 (Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 4) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus flavipes

毛壳(菌)科PDP (Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

肿红皮孔菌VIM (Vimentin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母VTN (Vitronectin) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

梨形卷枝霉PPOX (Protoporphyrinogen Oxidase) ELISA Kit拉丁属名: Helicostylum piriforme

裂孔平伏菌PRB1 (Basic Salivary Proline Rich Protein 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

海洋杆菌FOXC1 (Forkhead Box Protein C1) ELISA Kit拉丁属名: Pontibacter sp.

嗜碱假单胞菌FOXO1 (Forkhead Box Protein O1) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas alcaliphila

高加索链霉菌FOXO2 (Forkhead Box Protein O2) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces ciscaucasicus
节菱孢霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Alpha-Synuclein  核突触蛋白（抗原）球松素查尔酮1-(2,6-Dihydroxy-4-methoxyphenyl)-3-phenylprop-2-en-1-one对照药材 分 子 式: C16H14O4 分 子 量: 270.27996

Alpha-Synuclein  核突触蛋白（抗原）苏丹红ⅡSudan II中药标准品  分 子 式: C18H16N2O 分 子 量: 276.33

CA15-3 peptide  相关抗原抗原圆锥定 A1H-Indole-3-butanoic acid,R-methyl-,methyl ester,(RR)- 对照药材 分 子 式:  分 子 量:

Substance P Receptor (Neurokinin receptor1;Tachykinin receptor1)  P物质受体（抗原）五-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖beta-D-Glucose pentaacetate中药标准品  分 子 式: C16H22O11 分 子 量: 390.33928

p-Caldesmon(phosphor-Ser789)  磷酸化钙介质素抗原原儿茶醛3,4-Dihydroxybenzaldehyde中药标准品  分 子 式: C7H6O3 分 子 量: 138.12074

NK-2R peptide  神经激肽A受体（多肽抗原）6''-丙二酸沙苑子苷单酯中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

Calpain 1  钙蛋白酶（多肽）沙纸宁CPhenol,2-[3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)- propyl]-5-methoxy- 对照药材 分 子 式: C17H20O4 分 子 量: 288.3383