PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

微黄绿链霉菌Ext-N (N-Terminal Extein) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces flavidovirens

炭黑曲霉N-MID-OT (N-MID Osteocalcin) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus carbonarius

多产色链霉菌PTPRN (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type N) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces polychromogenes

乔木链格孢Ras-GAP1 (Rac-GTPase Activating Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Alternaria arborescens

污黑腐皮壳GAS (N-Acetylgalactosamine 6-Sulfatase) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

树舌PTPRO (Protein Tyrosine Phosphatase Receptor Type O) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

米根霉P27 (P27 Protein) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus  oryzae

蓝微褐链霉菌TP53 (Tumor Protein p53) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces cyaneofuscatus

胶孢PDAP1 (Pdgfa Associated Protein 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

孢木霉PDCN (Podocin) ELISA Kit拉丁属名: T.chlorosporum

长孺孢Preptin ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

灰色产色链霉菌P-Cadherin (Cadherin, Placental) ELISA Kit用途: Produces blasticidin A, B, C, blasticidin S, cytomycin (U.S. Pat. 3,183,153), toyokamycine. Transformation of benzodiazepine compounds (U.S. Pat. 3,806,418)

星孢毛锈伞P-GP (Permeability Glycoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

链格孢SELP (P-Selectin) ELISA Kit 拉丁属名: Alternaria alternata (Fr.) Keissl.

固氮菌RAPGEF1 (Rap Guanine Nucleotide Exchange Factor 1) ELISA Kit 用途: 固氮。
边缘无浆体(无形体)探针法荧光定量PCR试剂盒 ATF6(activating transcription factor 6)  活化转录因子6抗原3-O-顺式对香豆酰委陵菜酸3-O-cis-p-coumaroyltormentic acid化学标准品 分 子 式: C39H54O7 分 子 量: 634.842

ATP1b2/Na+K+ ATPase(ATPase, Na+/K+ transporting, beta 2 polypeptide)  钠钾ATP酶通道蛋白抗原盐酸小檗胺BERBAMINE DIHYDROCHLORIDE中药标准品  分 子 式: C17H18N2.2[HCl] 分 子 量: 323.2601

Kir6.2 peptide  ATP敏感性钾通道亚基kir6.2抗原异隐丹参酮Phenanthro[3,2-b]furan-7,11-dione,1,2,3,4,8,9-hexahydro-4,4,8-trimethyl-, (8S)-化学标准品 分 子 式: C19H20O3 分 子 量: 296.3603

AVPR2(arginine vasopressin receptor 2)  精氨酸加压素受体2抗原柯里拉京corilagin中药标准品  分 子 式: C27H22O18 分 子 量: 634.45

Aurora B  极光激酶B抗原尿苷Uridine中药标准品  分 子 式: C9H12N2O6 分 子 量: 244.20138

Nociceptin  孤菲肽（痛敏肽）（抗原）左旋箭毒碱chondodendrine中药标准品  分 子 式: C36H38N2O6 分 子 量: 594.69672

B7-H1/PDL1/CD274(programmed death ligand 1)  程序性死亡配体1（多肽）地芰普内酯2(4H)-Benzofuranone,5,6,7,7a-tetrahydro-6-hydroxy-4,4,7a-trimethyl-, (6S,7aR)-化学标准品 分 子 式: C11H16O3 分 子 量: 196.24294