PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

新疆溶杆菌COL6 (Collagen Type VI) ELISA Kit拉丁属名: Lysobacter xinjiangensis

黑木耳COL1α2 (Collagen Type I Alpha 2) ELISA Kit  用途: 食用、药用

拟青霉COL2α1 (Collagen Type II Alpha 1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

坚强芽孢杆菌COL3α1 (Collagen Type III Alpha 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

皱环球盖菇COL4α1 (Collagen Type IV Alpha 1) ELISA Kit 用途: 试验栽培

米兰链霉菌COL6α1 (Collagen Type VI Alpha 1) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces mediolani

规则东方喜盐菌COL7 (Collagen Type VII) ELISA Kit 拉丁属名: Halorientalis regularis

枯草芽孢杆菌COL8α1 (Collagen Type VIII Alpha 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

白酒  铅 COL10 (Collagen Type X) ELISA Kit 拉丁属名: 白酒  铅

酿酒酵母COL11α1 (Collagen Type XI Alpha 1) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

玫瑰淡紫链霉菌COL17 (Collagen Type XVII) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces roseolilacinus

黑色浅灰链霉菌Collagenase I ELISA Kit用途: 代谢产物具有活性及杀虫活性。

弗吉尼亚链霉菌Collagenase II ELISA Kit用途: 拮抗菌

镰刀菌NPYR1 (Neuropeptide Y Receptor Y1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

根瘤菌CLL1 (Collectin Liver 1) ELISA Kit用途: 固氮
粪产碱杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒 APC(Activated protein C)  APC活化蛋白C抗原二氢姜黄素Dihydrocurcumin中药标准品  分 子 式: C21H21NO5 分 子 量: 367.39514

Apelin  脂肪因子Apelin抗原对羟基苯乙酸2-(4-Hydroxyphenyl)acetic acid对照药材 分 子 式: C8H8O3 分 子 量: 152.14732

Apelin receptor/APJ receptor   Apelin receptor抗原光翠雀碱denudatine中药标准品  分 子 式: C22H33NO2 分 子 量: 343.50292

APG4B/AUTL1  APG4B细胞自噬相关抗原刺桐酚素6H-Benzofuro[3,2-c][1]benzopyran-3,6a(11aH)-diol,9-methoxy-10-(3-methyl-2-buten-1-yl)-, (6aS,11aS)-对照药材 分 子 式: C21H22O5 分 子 量: 354.39638

apoA1 (Apolipoprotein/APOA1 protein )human  载脂蛋白A1抗原蔗糖咪唑溶液(0.4mol/L,pH7.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J)  凝聚素α/β抗原柴胡皂苷FSaikosaponin F中药标准品  分 子 式: C48H80O17 分 子 量: 929.138600000001

Insulin Receptor-Alpha(ISR-Alpha)  受体-α（抗原）强磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.2)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量: