PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

大肠埃希氏菌NEF3 (Neurofilament 3) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia coli

无壳异担子菌NEFL (Neurofilament, Light Polypeptide) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉NOS1/nNOS (Nitric Oxide Synthase 1, Neuronal) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黄杆菌属C-jun (V-Jun Sarcoma Virus 17 Oncogene Homolog) ELISA Kit拉丁属名: Flavobacterium  fnyxellicola

豌豆根瘤菌CC16 (Clara Cell 16kD protein) ELISA Kit 用途: 固氮

河生肠杆菌生物Ⅰ型CLDN1 (Claudin 1) ELISA Kit 拉丁属名:  Lelliottia amnigena

美澳型核果褐腐病菌CLDN14 (Claudin 14) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

白乳菇CD109 (Cluster of Differentiation 109) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大肠埃希菌CD30 (Cluster of Differentiation 30) ELISA Kit拉丁属名: coli

固氮菌CD97 (Cluster of Differentiation 97) ELISA Kit 用途: 固氮。

葡萄座腔菌CD99 (Cluster of Differentiation 99) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

柠檬黄色红色杆菌CD4 (Cluster of Differentiation 4) ELISA Kit拉丁属名: Erythrobacter citreus

台湾根霉NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus formosensis Nakazawa

烟色拟盘多毛孢CLDN3 (Claudin 3) ELISA Kit 拉丁属名: Pestalotiopsis adusta

假单胞菌属NOS3/eNOS (Nitric Oxide Synthase 3, Endothelial) ELISA Kit拉丁属名: Pseudomonas  sp
荚膜阿耶罗菌探针法荧光定量PCR试剂盒说明书HCV-NS3  病毒-NS3（抗原）新鲁斯可皂苷元Spirosta-5,25(27)-diene-1,3-diol,(1b,3b)-中药标准品  分 子 式: C27H40O4 分 子 量: 428.6041

HCV-NS4a  病毒-NS4a（抗原）(-)-鹰爪豆碱7,14-Methano-2H,6H-dipyrido[1,2-a:1',2'-e][1,5]diazocine,dodecahydro-, (7S,7aS,14S,14aS)-化学标准品 分 子 式: C15H26N2 分 子 量:

HEV  病毒（抗原）β-香树脂酮醇 乙酸酯Olean-12-en-11-one,3-(acetyloxy)-, (3b)-对照药材 分 子 式: C11H7N2O3Scl 分 子 量: 282.70288

HGV(Hepatitis G vivus)  庚型肝炎病毒（抗原）紫云英苷Astragalin中药标准品  分 子 式: C21H20O11 分 子 量: 448.38

HisX6  聚组氨酸标签蛋白格列苯脲5-Chloro-N-(4-(N-(cyclohexylcarbamoyl)sulfamoyl)phenethyl)-2-methoxybenzamide中药标准品  分 子 式: C23H28N3O5Scl 分 子 量: 494.00352

HIV gp120  病毒（抗原）络石苷2(3H)-Furanone,4-[(3,4-dimethoxyphenyl)methyl]-3-[[4-(b-D-glucopyranosyloxy)-3-methoxyphenyl]methyl]dihydro-3-hydroxy-,(3S,4S)-中药标准品  分 子 式: C27H34O12 分 子 量: 550.55166

HSP-60( Heat shock protein-60)  热休克蛋白-60（抗原）松果菊苷echinacoside中药标准品  分 子 式: C35H46O20 分 子 量: 786.73