PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

季也蒙迈耶氏酵母BMP-1 (Bone Morphogenetic Protein 1) ELISA Kit 拉丁属名: Meyerozyma guilliermondii

平田头菇BMP-10 (Bone Morphogenetic Protein 10) ELISA Kit 用途: 食用、科研

酿酒酵母BMP-15 (Bone Morphogenetic Protein 15) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

短密木霉BMP-6 (Bone Morphogenetic Protein 6) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

粘质沙雷氏菌BMPR1A (Bone Morphogenetic Protein Receptor, type IA) ELISA Kit拉丁属名: Serratia marcescens

枯草芽孢杆菌BMPR2 (Bone Morphogenetic Protein Receptor II) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  subtilis

白僵菌BSP (Bone Sialoprotein) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉MOG (Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus niger

粪肠球菌(粪链球菌)MT1E (Metallothionein 1E) ELISA Kit拉丁属名: Enterococcus faecalis(Streptococcus faecalis)

藤黄微球菌BK (Bradykinin) ELISA Kit拉丁属名: Micrococcus luteus

枯草芽孢杆菌BNP (Brain Natriuretic Peptide) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

浅黄链霉菌MSMβ (Microseminoprotein Beta) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces flaveolus

牛链球菌 兰氏D群BRAK/CXCL14 (Breast and Kidney Expressed Chemokine) ELISA Kit拉丁属名: bovis

大肠埃希菌BRCA1 (Breast Cancer Susceptibility Protein 1) ELISA Kit拉丁属名: coli

酿酒酵母BRCA2 (Breast Cancer Susceptibility Protein 2) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae
嗜水气单胞菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格Cytochrome C  细胞色素 C（抗原）27-羟基胆固醇27-Hydroxycholesterol中药标准品  分 子 式: C27H46O2 分 子 量: 402.65294

ADRB3/ Beta3-AR ( Beta3-adrenergic receptor)  肾上腺素能受体β3蒲公英赛酮27-Norolean-14-en-3-one,13-methyl-, (13a)-对照药材 分 子 式: C30H48O 分 子 量: 424.70152

Cytomegalovirus (CMV)PP65  细胞巨化病毒(多肽)5-甲基基-苦参醇C化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

DDC (DOPA decarboxylase)  多巴胺脱羧酶（抗原）Acr-Bis(30%:1.6%，活性炭处理)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

EGFR- V III  人表皮生长因子受体-8（多肽片断抗原）盐酸野靛碱6-Aminopyrimidin-2(1H)-one hydrochloride中药标准品  分 子 式: C4H5N3O.HCl 分 子 量: 147.56294

Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase)  α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原大豆苷Daidzin中药标准品  分 子 式: C21H20O9 分 子 量: 416.38

SCCA peptide  抗原灯台树次碱Curan-17-oic acid,2,16-didehydro-12,19- dihydroxy-,methyl ester,(19S)- 对照药材 分 子 式: C20H24N2O4 分 子 量: 356.41556