PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

弯孢菌Apo A1-Ab (Anti-Apolipoprotein A1 Antibody) ELISA Kit用途: 研究

枯草芽孢杆菌LCN1 (Lipocalin 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

大肠埃希氏杆菌ApoA2 (Apolipoprotein A2) ELISA Kit拉丁属名: Escherichia  coli

茯苓ApoA4 (Apolipoprotein A4) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

荧光假单胞菌ApoB (Apolipoprotein B) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas fluorescens

美澳型核果褐腐病菌ApoC1 (Apolipoprotein C1) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

放线纤维菌ApoC2 (Apolipoprotein C2) ELISA Kit拉丁属名: Actinotalea arctic

蓝色犁头霉ApoC3 (Apolipoprotein C3) ELISA Kit拉丁属名: Absidia coerulea

休哈塔假丝酵母ApoC4 (Apolipoprotein C4) ELISA Kit拉丁属名: Candida  shehatae

连香树迪兹氏菌ApoD (Apolipoprotein D) ELISA Kit 拉丁属名: Dietzia cercidiphylli

巨大芽孢杆菌ApoE (Apolipoprotein E) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  megaterium

食吡啶红球菌ApoF (Apolipoprotein F) ELISA Kit 拉丁属名: Rhodococcus pyridinivorans

普通青霉ApoH (Apolipoprotein H) ELISA Kit 拉丁属名: Penicillium commune

酿酒酵母ApoM (Apolipoprotein M) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

小牛葡萄球菌CA6 (Carbonic Anhydrase VI) ELISA Kit拉丁属名: Staphylococcus vitulinus
腺病毒B型探针法荧光定量PCR试剂盒供应商Caspase-10   半胱胺酸蛋白酶-10（抗原）黄花香茶菜甲素，黄花甲素，大萼变型甲素Sculponeatin B对照药材 分 子 式: C20H26O6 分 子 量: 362.41684

Caspase-13   半胱胺酸蛋白酶蛋白-13（抗原）细叶远志皂苷Tenuifolin中药标准品  分 子 式: C36H56O12 分 子 量: 680.37

CD19(B-lymphocyte antigen CD19)  CD19异连翘酯苷AIsoforsythiaside standard中药标准品  分 子 式: C29H36O15 分 子 量: 624.58714

Clenbuterol Hydrochloride/BSA  盐酸克仑特罗偶联牛血清白蛋白BSA瑞香素7,8-Dihydroxycoumarin中药标准品  分 子 式: C9H6O4 分 子 量: 178.14

Clenbuterol Hydrochloride/KLH  盐酸克仑特罗偶联血蓝蛋白KLH水飞蓟宾silymarin中药标准品  分 子 式: C25H22O10 分 子 量: 482.44

Estradiol/BSA  雌二醇偶联牛血清白蛋白辛夷烯酮Denudatone对照药材 分 子 式: C15H19NO 分 子 量: 229.31746

DRADA/ADAR1(Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase)N terminal  双链RNA腺苷酸脱氨基酶抗原（N端）甲基橙皮苷Methylhesperidine中药标准品  分 子 式: C29H36O15 分 子 量: 624.59