PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

雷蘑(青腿子)TSLP (Thymic Stromal Lymphopoietin ) ELISA Kit 拉丁属名: Clitocybe gigantea

黄麻链霉菌PLAUR/uPAR (Plasminogen Activator, Urokinase Receptor) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces corchorusii

地窖粉孢革菌VEGF-C (Vascular Endothelial Growth Factor C) ELISA Kit 拉丁属名: Coniophora cerebella

洛格酵母VEGF-D (Vascular Endothelial Growth Factor D) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces logos van laer et Denamur ex Jorgensen

松口蘑VEGFR-2/KDR (Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

嘴突凸脐蠕孢DBP (Vitamin D Binding Protein) ELISA Kit 用途: 研究

枯草芽孢杆菌INS (Insulin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

莱比托游动球菌EMMPRIN/CD147 (Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer) ELISA Kit拉丁属名: Planococcus rifietoensis

顶孢头孢霉CD34 (Cluster Of Differentiation 34) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

地衣芽孢杆菌snRNP/Sm (Small Nuclear Ribonucleoprotein) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  licheniformis

秦氏蜜环菌CYB5A (Cytochrome b5) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

香菇CGβ (Chorionic Gonadotropin Beta Polypeptide) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

葡萄座腔菌sOX40L (soluble OX40L) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

苹果双壳菌TAP (Transporter Associated with Antigen Processing) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

亮白曲霉BRAF (B-Raf Proto Oncogene Serine/Threonine Protein Kinase) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  candidus
蜡状芽孢杆菌33探针法荧光定量PCR试剂盒说明书DPPA2 (developmental pluripotency associated gene2)  多能发育相关基因2抗原环烯醚萜 BCyclopenta[c]pyran-4-carboxylicacid, 7-(acetyloxy)-1-(b-D-glucopyranosyloxy)-1,4a,5,6,7,7a-hexahydro-4a,5-dihydroxy-7-methyl-,methyl ester, (1S,4aR,5R,7S,7aS)-对照药材 分 子 式: C19H28O13 分 子 量:

DR4/APO2/TRAILR1 (Death receptor 4)  死亡受体4抗原千层纸素Oroxylin中药标准品  分 子 式: C16H12O5 分 子 量: 284.26

DR5/TNFRSF10B/CD262 (Death receptor 5)  细胞调亡素/死亡受体5抗原苦参醇WKushenol W化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

DP-I/DSP(desmoplakin I )  桥粒斑蛋白1抗原血竭黄烷ADracoflavan A化学标准品 分 子 式: C49H46O10 分 子 量: 794.884

DVL1 (dishevelled 1)  蓬乱蛋白17,4'-二羟基黄酮7-Hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-chromen-4-one化学标准品 分 子 式: C15H10O4 分 子 量: 254.2375

Dynamin 2(Anti-Human Dynamin-2 )  鸟苷三磷酸酶－发动蛋白2抗体含羞草素1(4H)-Pyridinepropanoicacid, a-amino-3-hydroxy-4-oxo-, (aS)-中药标准品  分 子 式: C8H10N2O4 分 子 量: 198.176

Nadrin peptide  发育调节蛋白多肽抗原6-醛基异麦冬黄烷酮A6-Formylisoophiopogonanone A化学标准品 分 子 式: C19H16O7 分 子 量: 356.326