PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

嗜根考克氏菌RNASEH (Ribonuclease H )ELISA Kit拉丁属名: Kocuria  rhizophila

大豆慢生根瘤菌RNASET2 (Ribonuclease T2) ELISA Kit 用途: 与大豆共生固氮良好。

枝状枝孢菌RI (Ribonuclease Inhibitor) ELISA Kit  拉丁属名: Cladosporium cladosporioides

南极印度站游动球菌RNASE (Ribonuclease) ELISA Kit拉丁属名: Planococcus maitriensis

产气荚膜梭菌       毒素C型RPL10 (Ribosomal Protein L10) ELISA Kit 拉丁属名: perfringens       Type C

棉花枯萎RPL26 (Ribosomal Protein L26) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

榛色链霉菌NFκB (Nuclear Factor Kappa B) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces avellaneus

热带假丝酵母RANκL (Receptor Activator of  Nuclear Factor Kappa B Ligand) ELISA Kit拉丁属名: Candida  tropicalis

苏云金芽孢杆菌NF-κB p65 (Nuclear Factor Kappa B p65) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus thuringiensis

固氮菌MART/Melan-A (Melanoma Marker A) ELISA Kit用途: 固氮。

紧缩花褶伞MAGE (Melanoma-associated Antigen) ELISA Kit拉丁属名: Panaeolus sphinctrinus

束梗链格孢MMSAM (Melanoma Metastasis Surface Adhesion Molecule) ELISA Kit 用途: 病原菌

分枝节杆菌βMSH (beta-Melanocyte Stimulating Hormone) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter ramosus

香蕉MLZE (Melanoma Derived Leucine Zipper Extra Nuclear Factor) ELISA Kit用途: 植物病原菌

梭状芽孢杆菌ESF (Erythropoiesis Stimulating Factor) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  fusiformis
牛巴贝斯虫探针法荧光定量PCR试剂盒规格CDK7/Cyclin H/MAT1  周期素依赖性激酶7抗原3-O-没食子酰粘酸3"-O-Galloylmucic acid中药标准品  分 子 式: C11H9N3O2.Na 分 子 量: 238.19786

CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8)  周期素依赖性激酶8抗原苦瓜皂苷 C7beta-(beta-glucopyranosyloxy)-3beta-hydroxycucurbita-5,23,25-trien-19-al化学标准品 分 子 式: C36H56O8 分 子 量: 616.825

Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C)  周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗原二氢胆固醇5-α-cholestan-3-β-ol中药标准品  分 子 式: C27H48O 分 子 量: 388.67

CGP-39/YKL-40(Chitinase-3-like protein 1 )  软骨糖蛋白39（多肽）商陆皂苷T中药标准品  分 子 式:  分 子 量:

CEA(Carcinoembryonic Antigen )peptide  人癌胚抗原抗原甲基丁香酚Methyl eugenol中药标准品  分 子 式: C11H14O2 分 子 量: 178.23

Cecropin  抗菌肽/天蚕素（多肽）梭砂贝母酮碱;新贝甲素Cevan-6-one,3-hydroxy-, (3b,*,17b)-中药标准品  分 子 式: C27H43NO2 分 子 量:

HER2 receptor(erbB-2 isoform 2)  c-erbB-2受体抗原2-乙酰基洋丁香酚苷2-Acetylacteoside standard中药标准品  分 子 式: C31H38O16 分 子 量: