PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

PCR反应鉴定——PCR反应条件:

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。
以下列是公司正在热销的产品：

产气荚膜梭菌 毒素D型SOX9 (Sex Determining Region Y Box Protein 9) ELISA Kit 拉丁属名: perfringens Type D

泡盛曲霉GREM1 (Gremlin 1) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus awamori

砖红镰孢菌ON (Osteonectin) ELISA Kit 拉丁属名: Fusarium lateritium Nees

猴假单胞菌SF1 (Steroidogenic Factor 1) ELISA Kit 拉丁属名: Pseudomonas simiae

毛柄金钱菌(金针菇)PAPPA2 (Pappalysin 2) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

阿魏侧耳IgA (Immumoglobulin A) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

大豆慢生根瘤菌P-CK (Pan-Cytokeratin) ELISA Kit用途: 与大豆共生固氮,培养基pH4.5生长

牡丹拟盘多毛孢菌ALDOC (Aldolase C, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉PMP3 (Peroxisomal Membrane Protein 3) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus  niger

植物乳杆菌PPARγC1α (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma Coactivator 1 Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Lactobacillus plantarum

谷氨酸棒杆菌PPAR-α (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Alpha) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

大肠埃希氏菌PPAR-γ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Gamma) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

冻干粉  产肠毒素大肠埃希氏菌（阳性） LPO (Lactoperoxidase) ELISA Kit拉丁属名: 冻干粉  产肠毒素大肠埃希氏菌（阳性）

光滑青霉NXF1 (Nuclear RNA Export Factor 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

金针菇NMP-22 (Nuclear Matrix Protein 22) ELISA Kit拉丁属名: Flammulina  velutipes
病毒探针法荧光定量PCR试剂盒供应商ICAM-2/CD102(intercellular adhesion molecules-2)  细胞间粘附分子-2抗原异性南五味子乙素; 异南五味子素 Bangeloylisogomisin O化学标准品 分 子 式: C28H34O8 分 子 量: 498.565

CD56/NCAM1(Neural Cell Adhesion Molecule 1)  神经细胞粘附分子1抗原Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH6.8)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CD62L (ELAM-1/L-Selectin )  L选择素抗原双氢青蒿素(3R,*S,6R,8aS,9R,10S,12R,12aR)-3,6,9-Trimethyldecahydro-3H-3,12-epoxy[1,2]dioxepino[4,3-i]isochromen-10-ol中药标准品  分 子 式: C15H24O5 分 子 量: 284.34806

E-Selectin  E选择素抗原紫茎女贞苷Ab-D-Glucopyranoside,2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl O-6-deoxy-a-L-mannopyranosyl-(1®4)-O-6-deoxy-a-L-mannopyranosyl-(1®3)-, 4-[(2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoate]中药标准品  分 子 式: C35H46O19 分 子 量:

CD80/B7-1(human)  人刺激分子B7-1蛋白抗原达玛烯二醇IIDammar-24-ene-3,20-diol,(3b)-对照药材 分 子 式: C30H52O2 分 子 量: 444.73268

CD80/B7-1  刺激分子B7-1蛋白抗原桔梗皂苷元Olean-12-en-28-oicacid, 2,3,16,23,24-pentahydroxy-, (2b,3b,16a)-中药标准品  分 子 式: C30H48O7 分 子 量: 520.69792

CD82/KAI1 peptide  转移抑制蛋白1抗原瑞格列奈(S)-2-Ethoxy-4-(2-((3-methyl-1-(2-(piperidin-1-yl)phenyl)butyl)amino)-2-oxoethyl)benzoic acid 高端化学试剂 分 子 式: C27H36N2O4 分 子 量: 452.58574