PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

酿酒酵母Cyr61 (Cysteine Rich Protein, Angiogenic Inducer 61) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

香菇SPARC (Secreted Protein Acidic And Rich In Cysteine) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

异常威克汉姆酵母LRG1 (Leucine Rich Alpha-2-Glycoprotein 1) ELISA Kit拉丁属名: Wickerhamomyces anomalus

产色链霉菌REG3γ (Regenerating Islet Derived Protein 3 Gamma) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces chromogenes

地中海拟无枝酸菌S100A8 (S100 Calcium Binding Protein A8) ELISA Kit拉丁属名: Amycolatopsis mediterranei

柔薄迷孔菌S100A9 (S100 Calcium Binding Protein A9) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

齿被栓菌GPR37 (G Protein Coupled Receptor 37) ELISA Kit拉丁属名: Trametopsis cervina

出芽短梗霉S100A11 (S100 Calcium Binding Protein A11) ELISA Kit  拉丁属名: Aureobasidium  pullulans

枯草芽孢杆菌S100A12 (S100 Calcium Binding Protein A12) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

小孢根霉块状变种S100A13 (S100 Calcium Binding Protein A13) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus microsporus var. tuberosus

中慢生华癸根瘤菌S100A6 (S100 Calcium Binding Protein A6) ELISA Kit 用途: 与沙打旺、斜茎黄芪共生固氮

钠线菌属S100A7 (S100 Calcium Binding Protein A7) ELISA Kit拉丁属名: Natrinema  sp.

产氨短杆菌S100B (S100 Calcium Binding Protein B) ELISA Kit 拉丁属名: Brevibacterium  ammoniagenes

弗吉尼亚链霉菌SDC1 (Syndecan 1) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces virginiae

pLKO.1-puroSCF (Stem Cell Factor) ELISA Kit 拉丁属名: 宿主：Ecoli.stbl3
禽类支原体通用探针法荧光定量PCR试剂盒供应商CD138/Syndecan-1  多配体蛋白聚糖1抗原Tris-HCl缓冲液(0.05mol/L,pH7.0-9.0,无菌)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CD146/MCAM  细胞粘附分子CD146抗原Acr-Bis(30%:0.8%)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

ANPEN/CD13(Aminopeptidase N)  氨肽酶N抗原DNA退火缓冲液(5×)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

CD14(cluster of differentiation antigen 14)  CD14/内毒素受体抗原当归碱5H-Furo[3,2-g][1]benzopyran-5-one,2,3- dihydro-4-hydroxy-7-(hydroxymethyl)-2-(1- hydroxy-1-methylethyl)-,(2S)- 对照药材 分 子 式: C15H16O6 分 子 量: 292.28394

CD28  CD28抗原二氢辣椒素酯Nonanoic acid,8-methyl-, (4-hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl ester中药标准品  分 子 式: C18H28O4 分 子 量: 308.41252

CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)  活化白细胞粘附分子抗原多菌灵1H-Benzimidazole-2-carbamic acid methyl ester植物激素及核酸类 分 子 式: C9H9N3O2 分 子 量: 191.18666

CD177/NB1 peptide  嗜中性粒细胞抗原CD177抗原8-香叶草氧基补骨脂素9-((3,7-Dimethylocta-2,6-dien-1-yl)oxy)-7H-furo[3,2-g]chromen-7-one中药标准品  分 子 式: C21H22O4 分 子 量: 338.39698