PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

蜡样芽孢杆菌β-Glu (Beta Glucosidase) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus  cereus

板栗蛇孢日规壳IRAK3 (Interleukin 1 Receptor Associated Kinase 3) ELISA Kit拉丁属名: Ophiognomonia castanea

高加索异常倚囊霉GUSβ (β-glucuronidase) ELISA Kit拉丁属名: Pilaira caucasica

外来毛霉橙色变种SYCN (Syncollin) ELISA Kit拉丁属名: Mucor  adventitius var. aurantiacus

累四菲链霉菌TUBβ (β-Tubulin) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

鞘氨杆菌属β-TG (β-Thromboglobulin) ELISA Kit拉丁属名: Sphingobacterium  sp.

三叶草根瘤菌MIγ/CXCL9 (Monocyte Interferon Gamma Inducing Factor) ELISA Kit用途: 与白三叶草共生固氮

谷氨酸棒杆菌γ-ECS (γ-Glutamyl Systeine Synthetase) ELISA Kit拉丁属名: Corynebacterium  glutamicum

黄灰链霉菌PLA2G10 (Phospholipase A2, Group X) ELISA Kit拉丁属名: Streptomyces flavogriseus

云芝栓孔菌（变色栓菌）γGT1 (Gamma Glutamyltransferase 1) ELISA Kit拉丁属名: Trametes versicolor

钟器腐霉POMC (Pro-Opiomelanocortin) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

黑曲霉OXA (Orexin A) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  niger

头孢属PIK3Cβ (Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Beta Polypeptide) ELISA Kit拉丁属名: Cephalosporium sp.

类诺卡氏菌OIT3 (Oncoprotein Induced Transcript 3) ELISA Kit 拉丁属名: Nocardioides sp.

点枝顶孢PIK3Cσ (Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Delta Polypeptide) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用
侵入性丝囊霉菌（综合症病原）探针法荧光定量PCR试剂盒说明书PDGF-A  血小板源性生长因子-1（抗原）洋艾素2H-7,13b-Ethenopentaleno[1'',2'':6,7;5'',4'':6',7']dicyclohepta[1,2-b:1',2'-b']difuran-2,12(11H)-dione,3,3a,4,5,6,6a,6b,7,7a,8,9,10,10a,13a,13c,14b-hexadecahydro-6,8-dihydroxy-3,6,8,11,14,15-hexamethyl-,(3S,3aS,6S,6aR,6bS,7S,7aR,8S,10aS,11S,13aS,13bR,13cR,14bS)-中药标准品  分 子 式: C30H40O6 分 子 量: 496.635

PDGF-B  血小板源性生长因子-B（抗原）三七皂苷T5Notoginsenoside T5化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

PDGF-R-A  血小板源性生长因子受体-A（抗原）TEMED标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

PDGF-R-B  血小板源性生长因子受体-B（抗原）三七皂苷R1netoginsenoside R1中药标准品  分 子 式: C47H80O18 分 子 量: 933.127300000001

PMP-22(Peripheral Myelin Protein)  外周髓鞘蛋白-22多肽9-甲氧基铁屎米酮6H-Indolo[3,2,1-de][1,5]naphthyridin-6-one,9-methoxy-化学标准品 分 子 式: C15H10N2O2 分 子 量: 250.2521

PI3K  磷脂酰肌醇激酶（抗原）磷酸酶抑制剂(50×)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

BMP4(bone morphogenetic protein 4)  骨形态发生蛋白4（抗原）重楼皂苷IIPolyphyllin II中药标准品  分 子 式: C44H70O16 分 子 量: 855.017000000001