PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

油橄榄生曲霉CSF2Rβ (Colony Stimulating Factor 2 Receptor Beta) ELISA Kit 拉丁属名: Aspergillus olivicola

分枝农霉菌CA3 (Carbonic Anhydrase III, Muscle Specific) ELISA Kit拉丁属名: Agromyces ramosus

楚氏喜盐芽孢杆菌AIRA (Anti-Insulin Receptor Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Halobacillus trueperi

芽孢杆菌CYP1A1 (Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1) ELISA Kit 拉丁属名: Bacillus  atrophaeus

山扁豆生棒孢CYP1A2 (Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 2) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

瑞氏青霉AKA (Anti-Keratin Antibody) ELISA Kit拉丁属名: Penicillium  raistrickii

大丽花轮枝孢DCLK1 (Doublecortin Like Kinase 1) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

葡枝根霉DPYD (Dihydropyrimidine Dehydrogenase) ELISA Kit拉丁属名: Rhizopus  stolonifer

研究团队节杆菌DSE (Dermatan Sulfate Epimerase) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter arilaitensis

芽孢八叠球菌属EPYC (Epiphycan) ELISA Kit拉丁属名: Sporosarcina  sp.

乳酒假丝酵母FABP8 (Fatty Acid Binding Protein 8, Myelin) ELISA Kit拉丁属名: Candida  kefyr

玫烟色棒束孢FADS2 (Fatty Acid Desaturase 2) ELISA Kit拉丁属名: Isaria fumosorosea

秀珍菇FAIM3 (Fas Apoptotic Inhibitory Molecule 3) ELISA Kit 注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

冷温木拉克酵母FASN (Fatty Acid Synthase) ELISA Kit拉丁属名: Mrakia frigida

树脂壳菌FBLN4 (Fibulin 4) ELISA Kit拉丁属名: Resinicium granulare
衣氏放线菌探针法荧光定量PCR试剂盒规格CKLF1  趋化素样蛋白5,7-二羟基色原酮 7-芸香糖苷5,7-Dihydroxychromone 7-rutinoside化学标准品 分 子 式:  分 子 量:

ART(Artemin)(抗原)  马兜铃酸CAristolochic acid C中药标准品  分 子 式: C16H9NO7 分 子 量: 327.24516

AATK peptide  细胞凋亡关联酪氨酸激酶抗原人参皂苷Rh1Ginsenoside Rh1中药标准品  分 子 式: C36H62O9 分 子 量: 638.87208

AQP-2 (aquaporin Protein-2)  水通道蛋白-2（抗原）甘草黄酮C4',5,7-trihydroxy-8-prenylflavone化学标准品 分 子 式: C20H18O5 分 子 量: 338.35392

ABCA1(ATP binding cassette transporter A1)  腺苷三磷酸结合盒转运体A1抗原乙酰胺Acetamide对照药材 分 子 式: C2H5NO 分 子 量: 59.0672

TFPI/LACI  组织因子途径抑制剂岩大戟内酯BJolkinolide B中药标准品  分 子 式: C21H35N3O.2[HNO2] 分 子 量: 439.54898

GLUT12  葡萄糖转运蛋白12胭脂虫酸3-(Benzoyloxy)-2-(methoxycarbonyl)-8-azabicyclo[3.2.1]octane-8-carboxylic acid对照药材 分 子 式: C17H19NO6 分 子 量: 333.33586