PCR反应鉴定——PCR反应条件:

客户只需提供样品和待检测名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR检测方法包括以下步骤：

(1)产品仅用于科研将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；

(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。

其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。

其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
PCR实验方法步骤：

方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

视PCR仪有无热盖，产品仅用于科研不加或添加石蜡油。

2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。

3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下列是公司正在热销的产品：

不动杆菌属ACA-IgG (Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit拉丁属名: Acinetobacter  sp.

爪哇根霉ACA-IgM (Anti-Cardiolipin Antibody IgM) ELISA Kit用途: 产延胡索酸、苹果酸

酿酒酵母ACD (Adrenocortical Dysplasia Homolog) ELISA Kit拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

毕赤酵母ACH (Acetylcholine) ELISA Kit用途: 表达甘露聚糖酶，应用于饲料工业

鸭疫里氏杆菌AChE (Acetylcholinesterase) ELISA Kit拉丁属名: anatipestifer

烬灰红链霉菌烬灰红亚种AChRab (Acetylcholine Receptor Antibody) ELISA Kit 拉丁属名: Streptomyces cinereoruber subsp. cinereoruber

伪病毒ACO-2 (Aconitase 2) ELISA Kit拉丁属名: Pseudorabies       virus

运动节杆菌IL-18 (Interleukin 18) ELISA Kit拉丁属名: Arthrobacter agilis

褐顶环柄菇IL-19 (Interleukin 19) ELISA Kit用途: 属外生菌根菌

枯草芽孢杆菌ACTG1 (Actin Gamma 1) ELISA Kit拉丁属名: Bacillus subtilis

米曲霉ACTN2 (Actinin Alpha 2) ELISA Kit拉丁属名: Aspergillus  oryzae

赭色掷孢酵母ACTN3 (Actinin Alpha 3) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

石榴嗜蓝孢孔菌ACTα2 (Actin Alpha 2, Smooth Muscle) ELISA Kit注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或，非药用，非食用

酿酒酵母ACTα1 (Actin Alpha 1, Skeletal Muscle) ELISA Kit 拉丁属名: Saccharomyces  cerevisiae

Atopobium vaginae ADA (Adenosine Deaminase) ELISA Kit拉丁属名: Atopobium vaginae
猪胸膜放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒供应商AGER(Advanced glycosylation end product-specific receptor)  晚期糖基化终末产物特异性受体(抗原）棕矢车菊素5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-6-methoxy-4H-chromen-4-one中药标准品  分 子 式: C17H14O7 分 子 量: 330.28886

14-3-3 protein  14-3-3 蛋白（多肽抗原）Western转移缓冲液(NC,PVDF)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

14-3-3 family protein(Malus domestica (Apple) (Malus sylvestris))  植物14-3-3蛋白抗原大戟因子L1Euphorbia factor L1中药标准品  分 子 式: C32H40O8 分 子 量: 552.6552

FRA1/FOSL1 peptide   FRA-1多肽蛋白育亨宾碱yohimbine中药标准品  分 子 式: C21H26N2O3 分 子 量: 354.45

AIF　(Apoptosis-Inducing Factor)  调亡诱导因子(多肽片断抗原）Tris-HCl缓冲液(1mol/L,pH8.0)标准滴定溶液 分 子 式:  分 子 量:

Adenylate Kinase 1 (AK-1)  腺苷酸激酶-1磺胺吡啶Sulfapyridine化学标准品 分 子 式: C11H11N3O2S 分 子 量: 249.28894

Akt/PKB  蛋白激酶B（抗原）茴芹内酯5,6-Dimethoxy-2H-furo[2,3-h]chromen-2-one中药标准品  分 子 式: C13H10O5 分 子 量: 246.2155